用高效液相色谱法测定可可粉,料液,烟草制品中的可可碱.doc

用高效液相色谱法测定可可粉,料液,烟草制品中的可可碱烟草科ttt,’l!t~烟草动态2000用高效液相色谱法测定可可粉,料液,烟草制品中的可可碱Ffc’,MM。Fi,M。y’,H-[-sq~J/【关键词】高效液相色谱;可可粉;kka-;烟草制品可可碱【摘要】可可粉作为一种香味化舍物,广泛应用于改善烟草制品的吃味在烟草制品加工前期,通常把可可粉添加到料液中,然后特料液喷洒在烟叶上可可碱(3,7一二甲基黄嘌呤)是可可中的主要生物碱。是可可制品的一个标志,即所谓的指示性物质,常用于可可制品质量的评价。可可碱可用等梯度液相色谱法进行测定样品的制备是特等量的可可粉,料液,烟草制品在80″(2加有氧化镁的净化水一起搅拌。提取液经过滤后,用自动进样嚣注射到RP—C(5tm~,250nm~,4rmni。d。)(95%v/5%v)作为流动相进行洗脱,使用二极管阵列检测器进行检测。采用外标法进行定量。校正曲线范围为0。1～2。烟草制品中可可碱含量的测定结果范围为0。1303%至约0。04%,回收率90%。【中图分类号】TS411。1【文献标识码】B【文章编号】11302—0861(2000)04—13028—02黄嘌呤衍生物是一类属于嘌呤生物碱的化学物质,其中重要的成分有咖啡因(1,2,7一三甲基黄嘌岭),可可碱(3,7一二甲基黄嘌呤),茶碱(1,7一二甲基瞟呤)。

甲基黄嘌呤已引起了人们较大的兴趣,原因是:形成了可可的苦味;药理作用(尤其是兴奋作用);它是巧克力和可可饮料等食品的重要分析参数,并在质量评价方面被用作所谓的指示性物质。在烟草烘焙过程中产生的甲基黄嘌呤和哌嗪二酮,对形成烟草的似可可苦味有一定作用。可可碱以及咖啡因存在于脱脂可可粉中,茶碱却只有痕量存在。在发酵过程中可可碱分布在可可的内列出了可可内核和外壳化学组成的大致情况。可可基因类型和产地的不同,脱脂可可粉中的可可碱含量也不同。表2列出了不同产地的可可粉中可可碱和咖啡因的含量。南美优质可可与非洲国家可可中的咖啡因含量的对比发现,南美可可的咖啡因含量较低。因此可可碱和咖啡因之间有较密切的关分析甲基黄嘌呤衍生物易溶于热水,并且由于具有自由电子对的分子结构,所以有非常显着的紫外吸收。投稿日新:1999—12—15责任编辑:刘立全28发酵和风干后可可内核和外壳的化学组成(%)项目承脂肪咖啡因可可碱多酚纤维素淀粉戊聚糖藏分项目舍量(醉丽这种紫外吸收性质广泛应用于分析检测和定量分析。文献中已报道了大量的关于测定食物中甲基黄瞟呤的方法,特别是将生物碱分离,然后测定总氮的方法,不仅没有特别之处而且耗时。

一种IOCCC方法是根据紫外分光光度法进行测定的。此方法的缺点是:只能测定甲基黄嘌呤的总量;有紫外吸收的干扰化合物能干扰紫外分光光度法的测定AOAC采用带紫外检测器的HPLC法适用于可可碱和咖啡因的测量。AOAC法的样品制备包括:脱脂,用沸水提取脱脂产物,离心和膜过滤,但整个过程比较费时。本研究的目的是测定不同制品如可可粉,料液和烟草制品提取物中的可可碱含量。样品的制备要尽可能简单,但必须有效地消除底物的干扰。1。1样品制备,以下步骤适用于上述不同制品:在200ml带刻度的烧瓶中,准确称取l_5g磨碎的烟草制品粉末,料液或0。5g可可粉。加入lgMgO后,使用150ml的去离子水在沸腾的水浴中提取。冷却至室温,在提取液中加入去离子水至200ml。提取液经薄膜过滤器(。)过滤,转移到指形试管中用于液相色谱分析。在分析前,可可粉的提取液必须进行稀释。1。2仪器和色谱分析条件高效液相色谱仪的配置包括:自动进样品()HPLC泵(Merck-一6220)一1Tecl’dab)和一个二极管阵列检测器(}10dOA)。并配有带相应软件的Lc化学工作站用来进行数据的采集和计算。

预柱(35n’)和柱子()的固定相为(5。t。tm)。流动相为水/乙腈(95%v/5%v),流速为0。8ml/min。柱子和预柱的老化温度为40,检测波长为272nm。1。3校正程序将100mg的可可碱(纯度98%)溶于1L水制成储备液。由储备液配制成一系列浓度范围为0。1d至2。Omg/ml个校正标准溶液。每天都要制备标准溶液,且每天要进行校正程序。在上述的浓度范围内校正曲线呈线性。记录峰高值以用于计结果与讨论通常,用于制备料液的商用可可粉是由不同产地和质量的可可掺配而成。对不同供应商提供的不同质量的可可粉进行测定时发现,可可碱含量范围为1。77%至2。47%(见表3)。只有可可碱的峰作为主要峰存在于可可粉提取液的色谱图中。可可提取液的可可碱图谱的差异主要是由于在加工时采用了不同的提取过程(见表3)。知道了可可中可可碱的含量,就可估计出料液中可可的比例。表3显示了实验室制备的几种料液中可可碱的含量。通常,增加洗脱液中乙腈的比例可以缩短保留时间,并且不会由于底物效应而影响分离质量。采用上述流动相比例而延长可可碱的保留时间的优点在于:有显着紫外吸收特性的物质可可可粉,料液和可可提取物中可可碱的含量项目可可碱(%)可可A可可B可可C可可D可可E可可F可可G可可提取物A可可提取物B可可提取物C可可提取物D2。

172。312。。。o82德国市场上不同卷烟配方的可可碱含量卷烟配方可可碱(10″)在可可碱的前面被洗脱出来(尤其是当可可碱的量较低时),这可以从卷烟提取物的色谱图中得到证实。通过将可可碱储备液加到烟草制品(一种未加任何料液的配方)提取液中后测定的可可碱含量估算回收率。采用两个添加量,其中一个添加量接近校正曲线的最低浓度,另一个接近校正曲线的中间浓度。在低浓度时,回收率为115%;在较高浓度时,回收率为89%。氧化镁的吸收作用可减少烟草提取物在HPLC析中的底物效应。当在取液中加入超过1g的氧化镁时,回收率显着降低。因此,检查每一批新的氧化镁是否污染是十分重要的。通过保留时问和二极管阵列检测器在full-scan模式下的紫外光谱,可估算出可可碱的含量。卷烟配方中可可碱的含量在1710″至约的范围内(见表4)。此HPLC方法可以测定可可粉,可可提取物,料液和烟草制品中的可可碱。李栋,张仕华译自,7-,sby}眦。—,,325～33I,刘立全技)29